細胞復蘇新(xin)方(fang)案(an)，IKA MATRIX 恒(heng)溫混(hun)勻儀

細(xi)胞生物(wu)學實驗(yan)的(de)日(ri)常，都(dou)是(shi)跟細(xi)胞培養(yang)、凍存和復蘇(su)這(zhe)些基本(ben)的(de)操作(zuo)密(mi)不(bu)可(ke)分(fen)的。在細(xi)胞凍存和復蘇(su)領域壹(yi)直奉(feng)行著(zhe)壹條(tiao)黃金(jin)法(fa)則，那就(jiu)是(shi)“慢凍快融(rong)”！ 實驗(yan)證(zheng)明這(zhe)樣(yang)可以最大限(xian)度的(de)保存細胞活力(li)。

 慢(man)凍

細胞是(shi)很脆弱(ruo)的，尤其是(shi)哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)細(xi)胞，只有壹層(ceng)薄(bo)薄(bo)的(de)細胞膜，沒(mei)有堅固(gu)的(de)細(xi)胞壁保護(hu)，在進入凍存狀(zhuang)態前，緩慢的(de)降溫過程有助(zhu)於(yu)保存細(xi)胞的活力(li)。目(mu)前細胞凍存多(duo)采(cai)用甘油或(huo)二甲基亞(ya)碸(feng)（DMSO）作保護劑，這(zhe)兩種(zhong)物(wu)質(zhi)能(neng)提高細胞膜對水的(de)通(tong)透(tou)性，加上緩慢冷(leng)凍可使(shi)細胞內的水分(fen)滲出(chu)細胞外，減(jian)少(shao)細胞內冰晶(jing)的形(xing)成，從(cong)而減(jian)少(shao)由於(yu)冰晶(jing)形(xing)成造成的細(xi)胞損傷。標(biao)準的(de)凍存程序(xu)為(wei)降溫速率(lv)-1～-2℃/ min；當溫度(du)達(da)-25℃以下(xia)時，可(ke)增至(zhi)-5℃～-10℃/min；到(dao)-100℃時，則可(ke)迅(xun)速浸(jin)入液氮(dan)中。

快(kuai)融(rong)

 細(xi)胞復蘇，是(shi)指將凍存在(zai)液氮(dan)或者(zhe)-70℃冰箱(xiang)中(zhong)的(de)細(xi)胞解凍之後重新(xin)培養(yang)，細(xi)胞恢復(fu)生長的過程。復(fu)蘇(su)細胞應采(cai)用快速融(rong)化(hua)的方法(fa)，這(zhe)樣(yang)可以保(bao)證(zheng)細胞外結晶(jing)在很短(duan)的時(shi)間(jian)內(nei)融(rong)化(hua)，避免(mian)由於(yu)緩(huan)慢融(rong)化(hua)使(shi)水分(fen)滲入細(xi)胞內形(xing)成胞內再(zai)結晶(jing)對細胞造成的損(sun)傷。

 最常見(jian)的(de)復蘇工具

水作(zuo)為(wei)壹種(zhong)使(shi)用廣泛的導(dao)熱(re)介(jie)質(zhi)，具有良(liang)好(hao)的導(dao)熱(re)性(xing)，可以保(bao)證(zheng)快速加(jia)熱(re)，同(tong)時也(ye)可(ke)防(fang)止凍存管(guan)內部(bu)的局部過熱(re)。水浴是(shi)細胞培養(yang)實驗(yan)室(shi)的(de)標(biao)準配置(zhi)之壹(yi)，在(zai)進行細胞復蘇實驗(yan)時(shi)，無(wu)需額(e)外的輔(fu)助(zhu)設(she)備或試(shi)劑。然，水浴經常(chang)是(shi)作為實驗(yan)室(shi)共(gong)享(xiang)的設(she)備，若無專人(ren)值守(shou)，則水浴槽內(nei)的(de)水不(bu)會定(ding)期(qi)進行更(geng)換，就(jiu)會攜帶(dai)汙(wu)染(ran)，會間(jian)接(jie)導(dao)致(zhi)復蘇(su)細(xi)胞的汙(wu)染(ran)風險。復(fu)蘇(su)過程，常(chang)伴隨(sui)著(zhe)對凍存管(guan)的晃(huang)動(dong)（晃動(dong)可以防(fang)止管(guan)內樣(yang)品產生溫度(du)差(cha)異），管(guan)蓋(gai)處也(ye)有滲入(ru)水的(de)可(ke)能(neng)。